Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека.




Скачать 133.41 Kb.
НазваниеСтатья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека.
Дата публикации20.03.2013
Размер133.41 Kb.
ТипСтатья
uchebilka.ru > Биология > Статья
УДК 663.97:546:3:54.062

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ВОЛОСАХ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДАМИ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ИМПУЛЬСНОЙ ПОЛЯРОГРАФИИ И РЕНТГЕНОВСКОЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ

Джапаридзе Дж. И.1, Шавгулидзе Н. В.1, Хавтаси Н. С.1, Енукидзе Л. Г.1, Харисчаришвили И. З.2, Кириленко Е. К.3, Гальченко С. Н.4

1. Институт неорганической химии и электрохимии им. Р. И. Агладзе, Тбилиси, Грузия.

2. Центр медицинской элементологии «Биоэлемент», Тбилиси, Грузия.

3. Научно-технический центр «Вириа», Киев, Украина.

4. Киевский национальный университет им. Тараса Шевченко, Киев, Украина.

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня – микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. Основное внимание уделено возможностям двух аналитических методов анализа биопроб: дифференциальной импульсной полярографии (ДИП) и рентгеновской флуоресценции (РФА). Представлены результаты применения методики одновременного определения ионов Pb(II), Zn(II) и Cu(II) в волосах человека методами ДИП и РФА, проведена их сравнительная оценка.

^ Ключевые слова: дифференциальная импульсная полярография, рентгеновская флуоресценция, биопроба, микроэлементный анализ
Введение

В последние годы анализ биологических объектов стал одной из основных областей применения инструментальных методов анализа, так как такие исследования актуальны при диагностике врожденных патологий, профессиональных заболеваний, связанных со спецификой промышленного производства, экологически обусловленных заболеваний и т.д.

Недостаток жизненно важных элементов в питьевой воде, промышленное загрязнение окружающей среды токсичными и радиоактивными элементами, неполноценное питание, болезни, некоторые лекарственные средства могут приводить к возникновению заболеваний, в основе которых лежит дефицит, избыток или дисбаланс микроэлементов в организме. Для оценки уровня содержания микроэлементов в организме человека, наряду с такими диагностическими биосубстратами, как кровь, моча, ногти, хорошей информативностью обладают волосы. Для волос характерна фиксированная динамика роста (0,2-0,5 мм в день), в связи с чем, наиболее адекватной для оценки микроэлементного статуса организма, на момент обследования, является прикорневая часть волос. Элементы, которые с кровью попадают в клетки волос, в минеральный обмен организма включаются с существенным затруднением. В волосах происходит концентрирование микроэлементов, в отличие от крови, которая, в основном, выполняет в организме транспортную функцию [1,2]. Волосы наиболее полно отражают уровень содержания как токсичных (свинец, кадмий, мышьяк и т.д.), так и жизненно необходимых элементов (цинк, селен, железо и т.д.). Микроэлементный состав крови первым реагирует на повышение уровня содержания тяжелых металлов, но может не отражать истинный уровень их содержания в организме. Поэтому важно исследование таких биосубстратов, которые наиболее полно отражают элементный статус во всем организме. В этом отношении наиболее информативными являются волосы.

Исследование микроэлементов в волосах дает возможность выявить наличие патологических процессов на предклинической стадии, что позволяет внести соответствующую корректировку в профилактику заболевания. Все это имеет большое значение для превенции многочисленных заболеваний. Особую пользу анализ волос может принести при изучении влияния на организм человека некоторых микроэлементов и отдельных тяжелых металлов [3,4,5]. Данные анализа волос показывают, что отравления тяжелыми металлами в настоящее время встречаются все чаще. Химический анализ волос, взятых у людей, живущих сегодня, и у людей, умерших несколько столетий назад, показывает, что содержание металлов в волосах выросло в 1000 раз, что конечно, связано с резким ухудшением экологической среды.

Тяжелые металлы вызывают различные заболевания. Например, медь относится к эссенциальным микроэлементам, т.е. элементам, которые играют особо важную роль в процессах жизнедеятельности организма, при хронической интоксикации вызывает нарушения функции нервной системы, печени и почек. Цинк также относится к эссенциальным микроэлементам, однако высокий уровень цинка в организме человека, в первую очередь, отражается на уменьшении активности ряда ферментативных систем. Свинец – один из самых высокотоксичных микроэлементов. Его повышенное содержание в организме человека влияет на нервную систему (нейропатия), почки (нефропатия), сердечно-сосудистую систему.

Наиболее испытанными методами анализа волос являются атомно-абсорбционная спектроскопия, вольтамперометрия и рентгено-флуоресцентный метод [6].

Ранее были установлены оптимальные условия определения ионов Pb(II), Cd(II), Zn(II), Cu(II), Fe в крови и сыворотке крови человека методом дифференциальной импульсной полярографии (ДИП) [7].

В настоящей работе представлены результаты разработанной в Институте неорганической химии и электрохимии им. Р. И. Агладзе (Грузия) методики одновременного определения ионов Pb(II), Zn(II) и Cu(II) в волосах человека методом ДИП. Проведено сравнение полученных результатов с результатами рентгено-флуоресцентного анализа.
^ Материалы и методы исследования

Измерения проводили на полярографе ПУ-1 в режиме ДИП с ртутным капельным электродом по трехэлектродной схеме в термостатированной ячейке. Концентрации интересующих элементов (медь, цинк, свинец, кадмий) в параллельных пробах волос измерялись на рентгено-флуоресцентном спектрометре СЭР-01 «Элвакс» («Методика проведения измерений массовой доли химических элементов в волосах человека рентгено-флуоресцентным методом» (МВИ № 081\12-4502-00 от 21.07.00, аттестована Украинским государственным НПЦ стандартизации, метрологии и сертификации УкрЦСМ)).
Чувствительность метода ДИП находится в пределах 10-3÷5۰10-8моль/л, в связи с этим даже самые незначительные примеси в волосах могут исказить анализируемую картину. При проведении анализа волос необходимо избавиться от примесей, которые могут присутствовать, вследствие выделения пота, обработки волос шампунем, бальзамом, краской для волос и т.д. [8]. На сегодняшний день предложено более 15 методов промывки, подготовленных для анализа волос [9]. Перед проведением исследований волосы тщательно промывались ацетоном. Качество промывки подтверждалось отсутствием каких-либо дополнительных сигналов на фоновой вольтамперной кривой.

Предварительно были сняты полярографические кривые стандартных растворов на фоне 0,1М НСl, содержащие ионы меди, свинца и цинка в отдельности и при их совместном присутствии в растворе (рис.1).

Анализ свинца (II), меди (II) и цинка (II) в волосах заключается в следующем. Отбирают пробу волос (примерно 1,0 г) с затылочной части головы. Их помещают в чашку Петри и промывают ацетоном для удаления примесей. Затем тщательно, дважды промывают дистиллированной водой и сушат на фильтровальной бумаге. Взвешивают 1,0 г сухих волос и помещают в небольшой кварцевый стакан. Стакан помещают в муфельную печь и подвергают термической обработке в течение 1 часа при температуре 4000С. Полученный пепел растворяют сначала в 1 мл 1 моль/л НNO3, а затем в 1 мл 1 моль/л HCl. После этого раствор выпаривают, а осадок растворяют в 10 мл 0,1 моль/л HCl. Полученный раствор помещают в полярографическую ячейку и затем снимаются полярографические кривые от 0 до -1,2 В. Количественное определение ионов металлов в пробе проводят методом добавок. Для этого в ячейку, после получения первой полярограммы, добавляют известные количества стандартных растворов меди, свинца, кадмия и цинка одновременно: Cu(II) – 2 мкг/мл ÷ 8 мкг/мл; Pb(II) 0,3 мкг/мл ÷ 1,2 мкг/мл; Zn(II) 0,05 мг/мл ÷ 0,2 мг/мл. Снимают вторую полярограмму. Для установления степени воспроизводимости эксперимента опыты повторялись несколько раз в аналогичных условиях. Степень воспроизводимости опытов составила ±1,5%.

Таким образом, были построены дифференциально-импульсные кривые восстановления Pb(II), Zn(II) и Cu(II) в 1 г волос человека на фоне 0,1 моль/л HCl. Все три микроэлемента дают четко выраженные пики при строго определенных значениях потенциалов, соответствующих потенциалам полуволн исследуемых микроэлементов (рис.1).

Представляет интерес сопоставить полученные нами данные по содержанию микроэлементов в волосах человека, с данными, полученными другим методом. На сегодняшний день одним из передовых методов анализа биосубстратов, в том же числе волос, является метод рентгеновской флуоресцентной спектроскопии. Этот метод, в отличие от физико-химических методов, обеспечивает экспресс-анализ по всем элементам одновременно, в одном измерении, и, в большинстве случаев, не требует специальной обработки пробы.

Для анализа волос методом рентгеновской флуоресцентной спектроскопии, необходимо срезанные с затылка волосы очистить от внешних загрязнителей. Очистка производится сначала в ацетоне, затем - в бидистиллированной воде. Затем 50 мг волос измельчают, к ним добавляют связующий органический компаунд без примесей металлов. Смесь высушивается и из этой массы изготавливают таблетку диаметром 10мм, толщиной не более 2 мм и весом 50мг. Затем таблетка анализируется на приборе СЕР-01 на протяжении 10 мин. Спектр флуоресценции состоит из ряда аналитических линий. Каждой линии отвечает энергия флуоресцентного излучения, характерная для атомов данного элемента (рис.2.).



Рис. 2. Рентгено-флуоресцентный спектр пробы волос пациентки А.
Интенсивность спектральных линий зависит от концентраций элементов в пробе. Чувствительность спектрометра для большинства элементов составляет 1ppm (1мкг/г). Повысить чувствительность можно различными методами концентрирования.

Следует подчеркнуть – для сравнения результатов, одна и та же проба волос после измерения на приборе СЭР-01 подготавливалась для снятия дифференциально-импульсных кривых.
^ Результаты исследования и их обсуждение
Результаты полученные методами ДИП и рентгеновской флуоресцентной спектроскопии можно сравнить (табл.1).
Таблица 1

Сравнение результатов определения ионов Pb(II), Zn(II) и Cu(II) в волосах человека, полученных методами рентгеновской флуоресцентной спектроскопии и ДИП

Ионы

Метод рентгеновской флуоресцентной спектроскопии (мкг/г)

Метод ДИП

(мкг/г)

Отклонение в %




I проба

II проба

I проба

II проба

I проба

II проба

Сu(II)

8,3

11,8

10,8

14,4

23,2

18,1

Pb(II)

0,47

1,4

0,74

1,89

36,5

25,9

Zn(II)

77

39,8

86,75

44,21

9,7

11,2


Среднее отклонение составляет 21% и допустимо для межметодных систем измерения концентраций химических элементов. Например, для такого химического элемента как железо, концентрация которого измерялась следующими методами: AA, ICP, INAA, XRF, или же для титана (АА, СОL, ICP, XRF) стандартное отклонение находится в диапазоне 20-30% [10]. Возможная причина отклонения результатов измерений связана с проведением градуировочных работ с применением различных тестовых образцов (СЭР-01 градуировался по стандартным образцам растворов ионов металлов, которые изготавливаются Физико-химическим институтом им. А. В. Богатского НАН Украины в г. Одесса, и применяются для градуировки, аттестации и поверки аналитических приборов: фотоколориметров, спектрофотометров, атомно-абсорбционных спектрофотометров и др.). Учитывая, что эти две методики измеряют указанные элементы одновременно, есть основания предполагать, что соотношение элементов должно быть более стабильным. Поэтому, в данном случае лучше сравнивать не абсолютные величины содержания элементов в волосах, а их соотношение, и тем самым исключить эту возможную причину расхождения результатов (табл. 2).

Таблица 2

Сравнение результатов соотношения ионов Pb(II), Zn(II) и Cu(II) в волосах человека, полученных методами рентгеновской флуоресцентной спектроскопии и ДИП

Соотношение ионов

Метод рентгеновской флуоресцентной спектроскопии

Метод ДИП

Отклонение в %




I проба

II проба

I проба

II проба

I проба

II проба

Cu/Pb

17.66

8.43

14.59

7.62

17.35

9.6

Zn/Cu

9.28

3.37

8.03

3.07

13.42

8.98

Zn/Pb

163.83

28.43

117.23

23.39

28.44

17.72



Тем более что и с медицинской точки зрения, ни один биохимический или физиологический процесс не связан с каким либо одним отдельно взятым элементом. Во взаимодействии микроэлементов в обмене веществ наблюдаются физиологический синергизм и антагонизм. Синергизм это, когда присутствие одного элемента, усиливает активность другого. Антагонизм наблюдается в том случае, когда действие одного элемента направлено против действия другого.

Одним словом, важен не только уровень содержания – недостаточное или избыточное поступление в организм определенных микроэлементов, но особенно значимым является соотношение микроэлементов [11].

Действительно, исключив погрешность, вносимую различными методами градуировки приборов, среднее отклонение уменьшилось до 16% (табл.2).

Выводы

1. Стандартное отклонение для абсолютных величин концентраций цинка, меди и свинца, полученных с помощью методик, представленных в данной работе (методика одновременного определения ионов Pb(II), Zn(II) и Cu(II) в волосах человека методом ДИП и методика выполнения измерений массовой доли химических элементов в волосах человека рентгено-флуоресцентным методом), составляет 21% .

2. Для соотношения концентраций этих элементов стандартное отклонение – 16%.

3. Как показали исследования, и метод ДИП и метод рентгеновской флуоресценции могут успешно применятся для проведения методики определения тяжелых металлов в биопробах, в частности в волосах человека.

4. Показатели динамики соотношений элементов, полученные этими методиками могут быть основой для создания новых способов донозологической диагностики, позволяющих обеспечить проведение токсикологического мониторинга, направленного на снижение заболеваемости и сохранения здоровья населения.


Литература

1. Харисчаришвили И. З., Горгошидзе Б. Е. Анализ микроэлементного состава волос рентгено-флуоресцентным методом и его значение в деле диагностики заболеваний человека //Экспериментальная и клиническая медицина. - 2006. - №7(32). - С. 65-67.

2. Горгошидзе Б. Е., Харисчаришвили И. З. Вопросы медицинской элементологии и значение определения микроэлементов в биосубстратах для диагностики и профилактики заболеваний репродуктивной системы //Экспериментальная и клиническая медицина. - 2006. - №6(31). - С. 60-63.

3. Салам Мухамед Ратеб, Петров С. И. Определение микропримесей меди (II), свинца (II) и кадмия (II) в пищевых продуктах методом инверсионной вольтамперометрии //Ж. анал. химии. - 1984. - Т. ХХХIX, вып. 12. - С. 2172-2174.

4. Микроэлементы в питании человека. Доклад комитета экспертов ВОЗ. -М.: Медицина, 1975. - №532. - 73с.

5. Трахтенберг И. М., Колесников В. С., Луковенко В. М. Тяжелые металлы во внешней среде. - Минск: «Навука і тэхніка», 1994. - 285 с.

6. Осипова Е. А. Электроаналитические методы и проблема охраны окружающей среды // Соросовский Образовательный Журнал. - 2001. - №2. - С. 47-54.

7. Шавгулидзе Н. В., Габричидзе О.А., Енукидзе Л. Г., Лежава Н. Г., Герхард В., Джапаридзе Дж. И. // Georgian engineering news. - 2004. - N2. - С. 101-103.

8. Ryan D. F., Holzbecher I., Stuart D.C. // Clin. chem. – 1978. - V. 24.- P. 1996-2000.

9. Assanlan G. S., Obenleas P – Ibid. - 1977. - V. 23. - P. 1771-1772.

10. Certificate of Certified Reference Materials, Issued in 2004, Approved by China National Analysis Center for Iron and Steel.

11. М. В. Федосеенко, Р. Р. Шиляев, О. А. Громова и др. Значение и роль микроэлементозов в физиологии и патологии человека // Учебное пособие для студентов медицинских вузов. ГОУ ВПО Ивановская государственная медицинская академия Министерства здравохранения РФ – Іваново. - 2004 г. - C. 9-10.
^ DETERMINATION OF CONTENT OF HEAVY METALS IN HAIR WITH THE HELP OF METHODS OF DIFFERENTIAL PULSED POLAROGRAPHY AND X-RAY FLUORESCENT SPECTROSCOPY

Djaparidze Dj. I.1, Shavgulidze N. V.1, Havtasi N. S.1, Enukidze L. G.1, Harischarishvili I. Z.2, Kirilenko E. K.3, Galchenko S. N.4

1. Institute of inorganic chemistry and electrochemistry named by R. I. Agladze, Tbilisi, Georgia.

2. Centre of medical elementology «Bioelement», Tbilisi, Georgia.

3. Scientific and technical centre «Viria», Kiev, Ukraine.

4. National Taras Shevchenko University of Kiev, Kiev, Ukraine.
This article deals with a topical problem of microelement analysis of biological substratums. Influence of toxic elements on organism was examined. We mostly drew attention to the following two methods of analytical analysis of bioassays: differential pulsed polarography and X-ray fluorescence.

The results of simultaneous determination of ions of Pb (II), Zn (II) and Cu (II) in hair were presented with the help of DPP method and of RFA. The comparative estimation of results from DPP and X-ray fluorescence method was conducted.

^ KEY WORDS: differential pulsed polarography, X-ray fluorescence, bioassay, microelement analysis
ВИЗНАЧЕННЯ ВАЖКИХ МЕТАЛІВ У ВОЛОССІ ЛЮДИНИ МЕТОДАМИ ДИФЕРЕНЦІАЛЬНОЇ ІМПУЛЬСНОЇ ПОЛЯРОГРАФІЇ ТА РЕНТГЕНІВСЬКОЇ ФЛУОРЕСЦЕНЦІЇ

Джапарідзе Дж. І.1, Шавгулідзе Н. В.1, Хавтасі Н. С.1, Єнукідзе Л. Г.1, Харисчаришвілі І. З.2, Кириленко Є. К.3, Гальченко С. М.4

1. Інститут неорганічної хімії та електрохімії ім. Р. І. Агладзе, Тбілісі, Грузія.

2. Центр медичної елементології «Біоелемент», Тбілісі, Грузія.

3. Науково-технічний центр «Віріа», Київ, Україна.

4. Київський національний університет ім. Тараса Шевченка, Київ, Україна.

Стаття присвячена актуальній проблемі сьогодення – мікроелементному аналізу біосубстратів. Розглянуто вплив токсичних елементів на організм людини. Особлива увага звернена на можливості двох аналітичних методів аналізу біопроб: диференціальної імпульсної полярографії (ДІП) та рентгенівської флуоресценції (РФА). Представлені результати застосування методики одночасного визначення іонів Pb (II), Zn (II) та Cu (II) у волоссі людини методами ДІП та РФА, проведена їх порівняльна оцінку.

Ключові слова: диференціально-імпульсна полярографія, рентгенівська флуоресценція, біопроба, мікроелементний аналіз

Контактное лицо: Кириленко Евгений Константинович, канд. физ.-мат. наук,

НТЦ «Вириа», ул. Саксаганского, 44-В, Киев 01033, Украина, тел. . (044) 289-6150, тел. моб. +380636999494, e-mail:





Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconНоосферное управление рисками: человеческий фактор Ковалев А. П.,...
Дело в том, что по вине человека в настоящее время происходит подавляющее число аварий, и потенциальная невозможность учета именно...

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconВлияние спорта на организм человека
Возникнув гораздо позже в плане эволюции, психическая активность контролирует физическую. Влияние физической активности на деятельность...

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconЕ. А. Нафанец Статья посвящена анализу влияния искусства на формирование...
Духовно-моральный мир ребенка. Влияние искусства на формирование творческой личности

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconКакие органеллы клеток, исходя из функции, наиболее активны при восстановлении ткани?
Длительное влияние на организм токсических веществ привело к значительному снижению синтеза белков в гепатоцитах. Какие органеллы...

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconСтатья посвящена анализу общего значения социально-экономической...
Социально-экономическая деятельность земств как фактор формирования гражданского общества в Российской империи конца хіх-нач. ХХ...

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconВлияние тропосферного озона на растения и здоровье человека
Рассмотрено негативное влияние увеличения транспортных потоков по магистралям различного функционального назначения. Показано отрицательное...

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconСтатья посвящена анализу и систематизации опыта изучения интеллигентности в российской науке
Олейник О. Ю. Изучение проблем интеллигенции в 90-е годы: справочно-библиографическая информация // Интеллигенция и мир. – 2001....

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconЭкология и здоровье человека. Содержание:|Введение. Глобальные экологические...

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconКомпания ООО «Лаки Нет»
Статья посвящена анализу спутниковых технологий и выделению тех из них, которые являются, по мнению автора, наиболее релевантными...

Статья посвящена актуальной проблеме сегодняшнего дня микроэлементному анализу биосубстратов. Рассмотрено влияние токсических элементов на организм человека. iconСтатья посвящена анализу разработки и внедрения систем квалификаций...
Института информационных технологий и средств обучения Национальной академии педагогических наук Украины, г. Киев, Украина

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
uchebilka.ru
Главная страница


<