В. И. Коржов, А. Н. Алфёров, М. В. Коржов (20 октября 2004). Метаболизм митохондрий и микросом печени при экспериментальной бронхо-легочной патологии и применении омега-3 полиненасыщенных жирных кислот [ftp архив]. Url ftp://ft ifp kiev ua/original/2004/zip/korzhov2004 zip

Скачать 108.3 Kb.

Название	В. И. Коржов, А. Н. Алфёров, М. В. Коржов (20 октября 2004). Метаболизм митохондрий и микросом печени при экспериментальной бронхо-легочной патологии и применении омега-3 полиненасыщенных жирных кислот [ftp архив]. Url ftp://ft ifp kiev ua/original/2004/zip/korzhov2004 zip
Дата публикации	01.06.2013
Размер	108.3 Kb.
Тип	Документы

uchebilka.ru > Биология > Документы

www.ifp.kiev.ua

оригинальные статьи

 В.И. Коржов, А.Н. Алфёров, М.В. Коржов (20 октября 2004). Метаболизм митохондрий и микросом печени при экспериментальной бронхо-легочной патологии и применении омега-3 полиненасыщенных жирных кислот [FTP архив]. URL ftp://ftp1.ifp.kiev.ua/original/2004/zip/korzhov2004-3.zip
УДК: 616.233-002-092.6/.9:576.322.347:581.566.2
В.И. Коржов, А.Н. Алфёров, М.В. Коржов

Метаболизм митохондрий и микросом печени при экспериментальной бронхо-легочной патологии и применении омега-3 полиненасыщенных жирных кислот
Институт фтизиатрии и пульмонологии им. Ф.Г. Яновского АМН Украины
Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты (омега-3 ПНЖК) являются биологически активными веществами, обладающими широким спектром действия и с успехом применяются при ряде патологических состояний [ 1, 12 ]. Однако до настоящего времени недостаточно изучено влияние омега-3 ПНЖК на функции субклеточных структур при бронхо-легочной патологии [ 3 ].

В связи с этим, целью настоящей работы явилось изучение влияния омега-3 ПНЖК
( препарат Эпадол ) на функциональную активность митохондрий и микросом при экспериментальном остром и хроническом бронхитах и пневмосклерозе.

Работа выполнена на 160 половозрелых беспородных белых крысах массой 180 - 200 г, содержавшихся на стандартном рационе вивария. Животные были разделены на группы: интактные; получавшие Эпадол; с экспериментальным острым бронхитом, хроническим бронхитом, пневмосклерозом; с экспериментальным острым бронхитом, хроническим бронхитом и пневмосклерозом, получавшие Эпадол с профилактической и лечебной целью.

Для создания экспериментальной модели острого бронхита животным интратрахеально вводили порошок сефадекса марки А-25 в дозе 5 мг на 1 кг масы тела [ 8 ]. Исследования проводили на 7-й день после введения сефадекса и развития у животных острого бронхита.

Экспериментальный хронический бронхит у крыс вызывали путем трансторакального введения в паренхиму легких спиртового раствора туши в количестве 0,2 мл на 100 г масы тела. Через 20 дней в хвостовую вену животным вводили 25 % раствор суспензии свежих куриных эритроцитов в количестве 0,2 мл на 100 г масы тела. Через 3 месяца получали модель хронического неспецифического заболевания бронхов с чётко вираженными признаками хронического деструктивного бронхита [ 10 ].

Экспериментальную модель пневмосклероза получали путём ингаляции животным солянокислого гистамина ( 100 гамм в 0,3 мл физраствора ). Ингалировали трижды, с пятидневным интервалом. Через 2 месяца у животных развивался пневмосклероз, который характеризовался фиброзной деструкцией бронхов и легких, склерозом бронхиальных стенок, спазмом легочных артерий и вен, эмфиземой легких, облитерацией бронхов и бронхиол [ 7 ].

Омега-3 ПНЖК ( препарат “Эпадол” с содержанием омега-3 ПНЖК не менее 45 % ) в дозе 0,1 мл/кг массы тела вводили животным per-os ежедневно на протяжении одного месяца. Объектом исследования служили митохондрии и микросомы печени животных. Забор биологического материала для исследований выполняли при соблюдении правил работы с экспериментальными животными [ 9 ]. Крыс забивали декапитацией под кратковременным оглушающим эфирным наркозом. Печень отмывали от эритроцитов путём перфузии её холодной средой выделения ( 0,25 М сахарозы и 0,01 М версена ), гомогенизировали при 0 ^оС и методом дифференциального центрифугирования выделяли митохондрии [ 11 ] и микросомы
[ 13 ].

Скорость поглощения кислорода в митохондриях и микросомах печени изучали полярографическим методом с использованием хлорсеребряного электрода и открытого платинового электрода [ 4 ]. Для оценки функции дыхательной цепи митохондрий использовали следующие показатели: V₃ –фосфорилирующее дыхание; V₄ – скорость дыхания в состоянии покоя; Vф – скорость фосфорилирования; АДФ/О – коэффициент фосфорилирования.

Функцию микросомальной системы окисления изучали, используя в качестве субстратов пиридиннуклеотиды НАДН и НАДФН.

Содержание цитохрома Р-450 в микросомах печени определяли спектрофотометрически [ 5 ]. Белок в митохондрях и микросомах определяли по методу Лоури и соавт. [ 6 ].

Полученные результаты исследований подлежали закону нормального распределения вариационного ряда и обрабатывались параметрическим методом вариационной статистики с применением t-критерия Стьюдента [ 2 ].

Полученные данные свидетельствуют, что вводимый в течение месяца интактным животным Эпадол не оказывает существенного влияния на окислительное фосфорилирование в митохондриях печени (табл. 1), не влияет на НАДН- и НАДФН-зависимое дыхание и содержание цитохрома Р-450 в микросомах печени (табл. 2).

При остром, хроническом бронхитах и пневмосклерозе достоверно снижается по отношению к интактным животным скорость фосфорилирования на 35,2 %, 36,6 % и 43,6 % соответственно и коэффициент фосфорилирования на 20,4 %, 24,6 % и 21,1 % соответственно (табл. 1 ). Кроме того, при пневмосклерозе снижается также и скорость потребления кислорода митохондриями в состоянии покоя на 50,1 %.

Таблица 1 - Влияние Эпадола на окислительное фосфорилирование в митохондриях печени животных с бронхо-легочной патологией ( V_3,V₄ - мкатом О₂/мин/мг белка; Vф – мкмоль АДФ /мин/мг белка; АДФ/О – коэффициент фосфорилирования; субстрат – α-кетоглютарат; М±m; n = 8 )

Условия опыта	Изучаемые показатели
Условия опыта	V₃	V₄	Vф	АДФ/О
контроль	0,028±0,002	0,008±0,001	0,074±0,004	2,84±0,05
Эпадол	0,035±0,003	0,010±0,002	0,077±0,004	2,73±0,04
острый бронхит Эпадол + острый бронхит (профилактическое введение) острый бронхит + Эпадол (введение с лечебной целью)	0,025±0,002 0,030±0,002 0,030±0,003	0,007±0,001 0,008±0,001 0,007=0,001	0,046±0,003* 0,062±0,003# 0,053±0,004*	2,26±0,05* 2,60±0,06# 2,21±0,06*
хронический бронхит Эпадол + хронический бронхит (профилактическое введение) хронический бронхит + Эпадол (введение с лечебной целью)	0,022±0,002 0,030±0,003 0,029±0,003	0,007±0,001 0,008±0,001 0,008±0,001	0,045±0,003* 0,063±0,003# 0,051±0,004*	2,14±0,05* 2,67±0,06# 2,20±0,06*
пневмосклероз Эпадол + пневмосклероз (профилактическое введение) пневмосклероз + Эпадол (введение с лечебной целью)	0,020±0,003 0,030±0,003 0,028±0,002	0,004±0,0005* 0,007±0,001# 0,008±0,001#	0,040±0,003* 0,066±0,006# 0,047±0,004*	2,24±0,04* 2,76±0,06# 2,33±0,05*

Примечания:

1) * - разница показателей по отношению к интактным животным достоверна ( Р < 0,01 );

2) # - разница показателей по отношению к животным с бронхо-легочной патологией

достоверна ( Р < 0,01 ).
Применение Эпадола с профилактической целью приводит к достоверному повышению по отношению к животным с бронхо-легочной патологией, не получавших препарат, скорости фосфорилирования в митохондриях печени животных с острым бронхитом на 34,7 %, с хроническим бронхитом на 40,0 %, с пневмосклерозом – на 65,0 %, а так же величины коэффициента фосфорилирования на 15,0 %, 24, 7 % и 23,2 % соответственно.

При применении Эпадола с лечебной целью изменений в скорости фосфорилирования и коэффициента АДФ/О не наблюдалось.

Таблица 2 - Влияние Эпадола на скорость окисления ( V О₂ ) НАДН и НАДФН ( в натом O₂ мин/мг белка) и количество цитохрома Р-450 ( в нмоль/мг белка) в микросомах печени животных с бронхо-легочной патологией ( М±m; n = 8 )

Условия опыта	Изучаемые показатели
Условия опыта	V О₂ без добавле-ния НАДН	V О₂ с добавле-нием НАДН	V О₂ без добавле-ния НАДФН	V О₂ с добавлени-ем НАДФН	количество цитохрома Р-450
контроль	2,85±0,09	5,83±0,15	3,00±0,11	9,80±0,22	0,80±0,03
Эпадол	2,85±0,18	5,99±0,28	2,79±0,19	9,94±0,47	0,76±0,03
острый бронхит Эпадол + острый бронхит (профилактическое введение) острый бронхит + Эпадол (введение с лечебной целью)	3,17±0,14 3,00±0,16 3,03±0,16	6,13±0,18 6,22±0,27 5,21±0,14	2,91±0,12 2,81±0,11 2,94±0,12	7,50±0,24* 9,24±0,40# 6,91±0,31*	0,26±0,02* 0,52±0,04# 0,53±0,06#
хронический бронхит Эпадол + хронический бронхит (профилактическое введение) хронический бронхит + Эпадол (введение с лечебной целью)	2,75±0,17 2,80±0,18 2,77±0,16	5,04±0,24 5,47±0,27 5,28±0,25	2,31±0,16 2,71±0,18 2,92±0,21	5,60±0,25* 8,88±0,36# 6,70±0,30*	0,37±0,02* 0,79±0,04# 0,43±0,05*
пневмосклероз Эпадол + пневмосклероз (профилактическое введение) пневмосклероз + Эпадол (введение с лечебной целью)	2,44±0,13 2,76±0,15 2,77±0,14	4,11±0,18* 5,38±0,26# 4,47±0,21*	2,56±0,14 2,95±0,18 2,85±0,17	5,03±0,31* 8,54±0,44# 6,05±0,34*	0,46±0,02* 0,72±0,04# 0,48±0,04*

Примечание:

1) * - разница показателей по отношению к интактным животным достоверна ( Р < 0,01 );

2) # - разница показателей по отношению к животным с бронхо-легочной патологией

достоверна ( Р < 0,01 ).

При изученных нами патологических состояниях не было выявлено изменений в скорости поглощения кислорода микросомами печени при их свободном окислении (без НАДН и НАДФН) (табл. 2). Не изменялся так же и показатель дыхательной активности микросом печени у животных с острым и хроническим бронхитом при использовании ими экзогенного НАДН. Однако при пневмосклерозе НАДН-зависимое дыхание микросом достоверно снижается и при профилактическом применении Эпадола восстанавливается.

При использовании микросомами НАДФН в качестве доноров электронов, функция НАДФН-зависимой редокс цепи достоверно снижается при остром и хроническом бронхитах, пневмосклерозе ( на 23,4 %, 42,8 %, 48,6 % соответственно ). При этом достоверно уменьшается и количество цитохрома Р-450 в микросомах. Эпадол, применяемый с профилактической целью, восстанавливает НАДФН-зависимое дыхание микросом. Восстанавливает он так же и количество цитохрома Р-450 в микросомах. Применение Эпадола с лечебной целью существенно не сказалось на НАДФН-зависимом дыхании, содержании цитохрома Р-450.

Таким образом, при экспериментальном остром и хроническом бронхитах и пневмосклерозе нарушаются энергетические функции митохондрий и функции монооксигеназной цитохром Р-450 содержащей системы микросом печени. Наиболее выражены изменения при пневмосклерозе, менее – при остром бронхите. Эпадол, применяемый с профилактической целью, способствует восстановлению показателей энергетического обмена митохондрий и монооксигеназной системы микросом печени при бронхо-легочной патологи. Использование Эпадола с лечебной целью не приводит к достоверной нормализации изучаемых показателей, однако он способствует их увеличению по отношению к нелеченным животным.

Таким образом, Эпадол как при остром, так и при хроническом бронхите и пневмосклерозе может быть использован для реактивации нарушеных биоэнергетических функций митохондрий и функции монооксигеназной системы микросом печени.

Литература
1. Гончар К. Ефективність лікування хворих на туберкульоз легень з використанням Епадолу // Ліки. – 2003. – № 11. – С. 71 – 73.

2. Лапач С.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel - Киев: Морион. Издание 2 дополненное. – 2001. – 407 с.

3. Перспективы применения омега-3 ПНЖК в пульмонологии и фтизиатрии /
В.К. Гаврисюк, Н.А. Морозова, С.И. Лещенко и др. // Укр. пульмонологічний журнал. – 2003. – № 2. – С. 140 – 141.

4. Руководство по изучению биологического окисления полярографическим методом / Под ред. Г.М. Франка, М.Н. Кондрашовой, Е.Н. Моховой и др. – М.: Наука, 1973. – 280 с.

5. Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. — М.: Медицина, 1977.

– 325 с.

6. Справочник биохимика / Р.Досон, Д. Эллиот, У Эллиот и др. // Москва: Мир, 1991. – 543 с.

7. Успенский В.И. Экспериментальный гистаминовый пневмосклероз // Архив патологии. – 1962. – № 4. – С. 46 – 55.

8. Экспериментальная модель неинфекционного гранулематоза легких / О.В. Макарова, В.Л. Ковалева, А.С. Сладкопевцев и др. // Пульмонология. – 1996. – № 1. – С. 76 – 79.

9. Этика медико-биологического эксперимента в доклинических исследованиях
/ Г.П. Червонская, Г.П. Панкратова, Л.А. Миронова и др. // Токсикологический вестник. – 1998. – № 3. – С. 2 – 8.

10. Яценко В.П., Блонская Л.Ф., Колесова Н.А. Моделирование хронического неспецифического заболевания легких и гипертензии малого круга кровообращения на лабораторных животных // Укр. пульмонологічний журнал. – 1998. – № 3. – С. 62 – 66.

11. Allfroy V. Thе isolation of subzellular components // Biochemistry, physiology, morfology. – 1969. – Vol. 11, № 7. – P. 254 – 255.

12. Olanoff L.S., Reines H.D. Effects of docosahexanoic acid on pulmonary capillary leak and tromboxnes // J. Surg. Res. – 2001. – Vol. 53, № 13. – P. 151 – 159.

13. Silman N., Artman M., Engelderg H. Effect of magnesium and spermine on the aggregation of Bacterial and mammalian ribosomes // Biochimica et biophisica acta.– 1965.– № 103. – P. 231 – 240.

Добавить документ в свой блог или на сайт

	В. И. Коржов, А. Н. Алфёров В. И. Коржов, А. Н. Алфёров (19 маz 2004). Энергетический обмен митохондрий печени при экспериментальном пневмосклерозе и применении...		Функциональное состояние цитохром р-450-оксигеназной системы микросом... В. Н. Жадан, М. В. Коржов, В. А. Вальтер (8 июня 2004). Функциональное состояние цитохром р-450-оксигеназной системы микросом печени...
	В. И. Коржов, А. Н. Алфёров В. И. Коржов, А. Н. Алфёров (14 сентября 2004). О возможности коррекции ω-3 полиненасыщенными жирными кислотами нарушений энергетического...		В. И. Коржов, А. Н. Алферов, М. В. Коржов и др. (12 марта 2002).... В. И. Коржов, А. Н. Алферов, М. В. Коржов и др. (12 марта 2002). Влияние омега-3 полиненасыщенных жирных кислот на монооксигеназную...
	В. И. Коржов, А. Н. Алферов, М. В. Коржов и др. (12 февраля 2002).... В. И. Коржов, А. Н. Алферов, М. В. Коржов и др. (12 февраля 2002). Влияние омега-3 полиненасыщенных жирных кислот на окислительное...		В. И. Коржов, А. Н. Алфёров В. И. Коржов, А. Н. Алферов (13 мая 2003). Применение омега-3 полиненасыщенных жирных кислот при экспериментальном хроническом бронхите...
	Проблема выявления больных туберкулезом в группах риска по данным... Ю. И. Фещенко, В. Г. Матусевич, В. М. Мельник, В. А. Юхимец и др. (11 марта 2003). Проблема выявления больных туберкулезом в группах...		В. А. Юхимец и др. (11 марта 2003). Проблема выявления больных туберкулезом... Ю. И. Фещенко, В. Г. Матусевич, В. М. Мельник, В. А. Юхимец и др. (11 марта 2003). Проблема выявления больных туберкулезом в группах...
	В. И. Коржов, А. Н. Алферов, В. Н. Жадан и др. (16 сентября 2002).... В. И. Коржов, А. Н. Алферов, В. Н. Жадан и др. (16 сентября 2002). Коррекция омега-3 полиненасыщенными жирными кислотами биоэнергетических...		В. А. Юхимец, Т. Б. Рагузина, В. Г. Слабченко и др. (21 ноября 2001).... В. А. Юхимец, Т. Б. Рагузина, В. Г. Слабченко и др. (21 ноября 2001). Негоспитальные пневмонии у больных пожилого и старческого возраста...

Похожие: